معلومة

3.2 ب: طرق التلوين العامة - علم الأحياء

3.2 ب: طرق التلوين العامة - علم الأحياء


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

أهداف التعلم

  • قارن والتباين في تلطيخ المختبر والحي

التلوين هو تقنية تستخدم في الفحص المجهري لتعزيز التباين في الصورة المجهرية. كثيرًا ما تُستخدم البقع والأصباغ لإبراز الهياكل الموجودة في الميكروبات لعرضها ، غالبًا بمساعدة المجاهر المختلفة. يمكن استخدام البقع لتحديد وفحص أنواع مختلفة من الميكروبات ، ومراحل مختلفة من الحياة الخلوية (على سبيل المثال ، الدورة الانقسامية) ، وحتى العضيات داخل الخلايا الفردية (على سبيل المثال ، الميتوكوندريا أو البلاستيدات الخضراء).

في الجسم الحي تلطيخ هو عملية صباغة الأنسجة الحية - في الجسم الحي تعني "في الحياة" (على عكس في المختبر تلطيخ). عندما تأخذ خلية أو بنية معينة لونًا (ألوانًا) متناقضة ، يمكن رؤية شكلها (مورفولوجيا) أو موضعها داخل الخلية أو الأنسجة ودراستها بسهولة. الغرض المعتاد هو الكشف عن التفاصيل الخلوية التي قد لا تكون واضحة لولا ذلك ؛ ومع ذلك ، يمكن أن يكشف التلوين أيضًا عن مكان حدوث مواد كيميائية معينة أو تفاعلات كيميائية معينة داخل الخلايا. في المختبر يتضمن التلوين خلايا أو هياكل التلوين التي تمت إزالتها من سياقها البيولوجي. غالبًا ما يتم الجمع بين بعض البقع للكشف عن تفاصيل وميزات أكثر مما يمكن أن تكشفه بقعة واحدة بمفردها ، والبقعة المضادة هي بقعة تزيد من رؤية الخلايا أو الهياكل عندما لا تكون البقعة الرئيسية كافية. يمكن للعلماء والأطباء الجمع بين التلوين وبروتوكولات محددة للتثبيت وإعداد العينات ويمكنهم استخدام هذه التقنيات القياسية كأدوات تشخيص متسقة وقابلة للتكرار.

يوجد عدد لا يُصدق من البقع التي يمكن استخدامها بعدة طرق مختلفة. فيما يلي بعض الجوانب المشتركة لعملية التحضير في المختبر تلطيخ.

  • التثبيت: يمكن أن يتكون هذا بحد ذاته من عدة خطوات. يهدف التثبيت إلى الحفاظ على شكل الخلايا (الميكروبات في هذه الحالة) قدر الإمكان. في بعض الأحيان ، يتم استخدام التثبيت الحراري لقتل الخلايا والالتصاق بها وتغييرها حتى تتقبل البقع. تولد معظم المثبتات الكيميائية روابط كيميائية بين البروتينات والمواد الأخرى داخل العينة ، مما يزيد من صلابتها. تشمل المثبتات الشائعة الفورمالديهايد والإيثانول والميثانول وحمض البيكريك.
  • نفاذية: هذا ينطوي على علاج الخلايا (عادة) مع خافض للتوتر السطحي خفيف. يذيب هذا العلاج أغشية الخلايا ، مما يسمح لجزيئات الصبغة الأكبر بالدخول إلى داخل الخلية.
  • التركيب: تتضمن هذه الخطوة عادةً إرفاق العينات بشريحة مجهر زجاجي للمراقبة والتحليل. في بعض الحالات ، قد تنمو الخلايا مباشرة على شريحة. بالنسبة لعينات الخلايا السائبة ، يمكن تطبيق العينة مباشرة على شريحة.

في أبسطها ، قد تتضمن عملية التلوين الفعلية غمر العينة (قبل أو بعد التثبيت والتركيب) في محلول الصبغة ، متبوعًا بالشطف والمراقبة. ومع ذلك ، تتطلب العديد من الأصباغ استخدام مادة سامة - مركب كيميائي يتفاعل مع البقعة لتشكيل راسب ملون غير قابل للذوبان. عندما يتم غسل محلول الصبغة الزائد ، تبقى البقعة المغطاة. هناك مجموعة لا تصدق من البقع التي يمكن استخدامها في هذه الخطوة ، من تلك التي تلطخ أنواعًا ميكروبية معينة (انظر الشكل أدناه) إلى تلك التي تبرز الأجزاء الفرعية أو العضيات للخلية ، مثل النواة أو الشبكة الإندوبلازمية. بدلا من ذلك ، يمكن استخدام تلطيخ سلبي. هذه طريقة تلطيخ بسيطة للبكتيريا ، يتم إجراؤها عن طريق تلطيخ الخلايا على الشريحة ثم تطبيق nigrosin (صبغة اصطناعية سوداء) أو حبر هندي (معلق مائي لجزيئات الكربون). بعد التجفيف ، يمكن رؤية الكائنات الحية الدقيقة في الفحص المجهري للمجال الساطع حيث تتباين الشوائب الأخف بشكل جيد مع البيئة المظلمة المحيطة بها

يعيش، في الجسم الحي يشترك الفحص المجهري للتلطيخ في العديد من هذه الخطوات ، باستثناء التثبيت ، الذي يقتل دائمًا الميكروب المراد فحصه.

النقاط الرئيسية

  • التلوين في الجسم الحي ، الذي يصور الخلايا الحية ، والتلوين في المختبر ، الذي يصور الخلايا الثابتة ، لهما استخدامات مهمة.
  • هناك مجموعة كبيرة من البقع التي يمكن استخدامها على الميكروبات التي يمكنها إبراز أي خاصية للخلية تقريبًا ، حتى العضيات داخل الخلية.
  • يمكن أن تكون بروتوكولات التلوين معقدة ، لكنها تشترك في بعض الخطوات الأساسية: التحضير والتثبيت والتلطيخ والتركيب.

الشروط الاساسية

  • التوتر السطحي: عامل نشط على السطح ، أو عامل ترطيب ، قادر على تقليل التوتر السطحي للسائل ؛ مركبات عضوية نموذجية لها "رأس" محبة للماء و "ذيل" كاره للماء
  • عضية: هيكل متخصص موجود داخل الخلايا ينفذ عملية حياة محددة (على سبيل المثال ، الريبوسومات ، الفجوات)

التراخيص والمزايا

المحتوى المرخص له CC ، توزيع محدد

  • كلية OpenStax ، علم الأحياء. 16 أكتوبر 2013.

إجراءات التلوين والتجزئة العامة للتصوير والتحليل عالي المحتوى

يعد الفحص المجهري الكمي المؤتمت ، والمعروف أيضًا باسم التصوير عالي المحتوى (HCI) ، نهجًا تحليليًا سريع النمو في بيولوجيا الخلية. نظرًا لأن تحليل الصور الآلي يعتمد بشكل كبير على الترسيم القوي للخلايا والمناطق الفرعية الخلوية ، فإن الطرق الموثوقة لوضع العلامات على الخلايا هي عنصر حاسم في سير عمل HCI. عادةً ما يتم وضع علامات على الخلايا لتجزئة الصورة باستخدام مجسات الفلورسنت التي تربط الحمض النووي لترسيم حدود الخلايا القائمة على النواة أو مع تلك التي تتفاعل مع البروتينات لتحليل الصورة بناءً على تلطيخ الخلية بالكامل. تلعب هذه الكواشف ، جنبًا إلى جنب مع إعدادات الأدوات والبرامج ، دورًا مهمًا في التجزئة الناجحة للخلايا في مجموعة سكانية لتحليل الصور الآلي والكمي. في هذا الفصل ، نصف الإجراءات القياسية لوضع العلامات وتجزئة الصور في كل من عينات الخلايا الحية والثابتة. سيوفر الفصل أيضًا إرشادات استكشاف الأخطاء وإصلاحها لبعض المشكلات الشائعة المرتبطة بهذه الجوانب من HCI.

الكلمات الدالة: CellMask CellTracker تصوير عالي المحتوى فحص عالي المحتوى تجزئة نووية.


تتوفر بقع خاصة بالأعضاء والأمراض

نحن نقدم تلطيخ الكيمياء النسيجية التي يمكن إجراؤها على قسم الأنسجة المضمن بالبارافين أو أقسام الأنسجة المجمدة. وعلماؤنا من ذوي الخبرة العالية في تلطيخ النسيج الكيميائي. فيما يلي عينة من أنواع طرق التلوين التي نقوم بتنفيذها:

تلطيخ الهيماتوكسيلين والأيوزين (H & ampE): هذه طريقة تلطيخ قياسية كلاسيكية لقسم الأنسجة تستخدم على نطاق واسع لفحص مكونات الأنسجة من أجل التحليل المرضي ، وهي قابلة للتطبيق في جميع الأجهزة ونماذج الأمراض. إن علمائنا على دراية جيدة بهذه الطريقة ، بناءً على ارتباط الحمض النووي والمكونات الحمضية الأخرى للأنسجة بصبغة الهيماتوكسيلين الأساسية. بقعة الحمضية المضادة ، يوزين ، ترتبط بالمكونات الأساسية في الأنسجة ، مثل البروتينات السيتوبلازمية.

تلطيخ H & ampE في أقسام: أ) الجلد ب) الحبل الشوكي ج) مخلب

تلطيخ ماسون ترايكروم (MT): تستخدم هذه الطريقة بشكل أساسي لتمييز الكولاجين عن أنسجة العضلات ، وهي قابلة للتطبيق والموصى بها في نماذج التليف ، ودراسات التئام الجروح ، ونماذج الاحتشاء وغيرها.

تلطيخ ماسون ثلاثي الكروم في أقسام الرئة من تليف الرئة الناجم عن البليوميسين:

أ) مجموعة التحكم ب) المجموعة التي يسببها البليوميسين

تلطيخ الثيونين: تستخدم هذه الطريقة لتلوين أقسام الدماغ وتصور الآفات العيانية ، على سبيل المثال بعد انسداد MCA.

تلطيخ الثيونين في أقسام الدماغ A) Naïve B) Post MCAo - نموذج السكتة الدماغية

تلطيخ حمض الدوري - شيف (PAS): تستخدم هذه الطريقة لتلطيخ السكريات مثل الجليكوجين والمواد المخاطية مثل البروتينات السكرية والجليكوليبيدات والميوسين في الأنسجة على سبيل المثال. أنسجة القولون من نموذج التهاب القولون الناجم عن TNBS.

تلطيخ التولويدين الأزرق: تستخدم هذه الطريقة لتلوين الخلايا البدينة الموجودة في النسيج الضام ويحتوي السيتوبلازم على حبيبات تتكون من الهيبارين والهيستامين. بعد تلطيخ التولويدين ، تلطخ الخلايا البدينة باللون الأحمر الأرجواني والخلفية باللون الأزرق.


تلطيخ نووي بطريقة Giemsa & # 8217s وتفاصيله

لتلطيخ المواد النووية البكتيرية بواسطة تقنية التلوين Giemsa & # 8217s.

مقاربة

الحمض النووي مادة وراثية أساسية لجميع الكائنات الحية الدقيقة باستثناء بعض الفيروسات. تفتقر الخلية البكتيرية إلى نواة جيدة التنظيم. إنها البنية الأساسية للخلية الحية. تؤدي Nucleus وظائف مهمة مثل النمو والأنشطة الأيضية والتكاثر ونقل الشخصيات الوراثية. تسمى المادة النووية للبكتيريا أيضًا بجسم نواة الكروماتين. تحتوي الخلية البكتيرية على محتوى نووي أحادي الصبغة ولديها نسخة واحدة من مادة DNA مزدوجة الشريطة. إلى جانب الحمض النووي ، قد تمتلك بعض البكتيريا مادة كروموسومية إضافية تسمى البلازميد. المواد النووية للبكتيريا ملطخة باستخدام طريقة Giemsa & # 8217s بينما الطريقة الأخرى & # 8217s التي يمكن استخدامها هي طريقة Feulgen & # 8217s وطريقة Robinow & # 8217s.

متطلبات

  1. مثبتات Bouin & # 8217s
  2. 1 N HCL
  3. حمام الماء
  4. صبغة Giemsa & # 8217s
  5. تعليق الخلية

إجراء

  1. تم أخذ شريحة نظيفة خالية من الشحوم ويتم تحضير مسحة سميكة باستخدام حلقة سلكية معقمة.
  2. يُسمح للشريحة أن تجف في الهواء ثم يتم إصلاح اللطاخة باستخدام مثبت Bouin & # 8217s لمدة 15 دقيقة هنا نتجنب خطوة التثبيت الحراري.
  3. علاوة على ذلك ، بعد التثبيت الكيميائي ، تتم معالجة الشريحة بمحلول 1 N HCl في حمام مائي عند 60 درجة مئوية لمدة 5 دقائق تقريبًا.
  4. بعد 5 دقائق ، يتم شطف الشريحة بالماء وغمرها ببقعة Giemsa & # 8217 لمدة 3 إلى 5 دقائق بعد ملاحظة هذه الشريحة تحت عدسة الغمر بالزيت.

مخطط انسيابي - إجراءات تقنية التلوين النووي

آلية

يتم تحضير صبغة Giemsa & # 8217s بمزيج من بقعتين هما أزرق الميثيلين (صبغة أساسية) ويوزين (صبغة حمضية) بحيث يكون للبقعة الناتجة خصائص كل من الصبغة. تعتبر كروماتيدات الخلية ذات طبيعة حمضية عالية ، لذلك عندما تتفاعل مع بقعة Giemsa & # 8217s ، فإنها تعطي لونًا أرجوانيًا محمرًا للحمض النووي. تتم إزالة الحمض النووي الريبي للخلية عن طريق خطوة التحلل المائي الحمضي في هذه الخطوة ، تتم معالجة اللطاخة بمحلول 1 N HCl في حمام مائي بدرجة حرارة 60 درجة مئوية لمدة 5 دقائق خلال هذه الخطوة بسبب الحرارة وحمض الروابط المزدوجة بين القاعدة أزواج من جزيء الحمض النووي الريبي تحصل على أسبوع وتنكسر. في حين أن مادة الحمض النووي لديها روابط ثلاثية بين بعض أزواج القواعد ، لذلك لا يتحلل جزيء الحمض النووي ، وبالتالي فإن جزيء الحمض النووي فقط يصبغ ويبقى السيتوبلازم عديم اللون.

الملاحظة

يظهر السيتوبلازم عديم اللون بينما تظهر المواد النووية باللون الأرجواني.


كتيب الكيمياء المناعية والتهجين في الموقع لسرطان الإنسان ، المجلد 4

تحليل تلطيخ عامل النمو البطاني الوعائي

يعتبر التلقيح المناعي باستخدام VEGF إيجابيًا عند ملاحظة تلطيخ السيتوبلازم الواضح في الخلايا السرطانية ، بغض النظر عن عدد الخلايا الملطخة. يتم تحليل تعبير VEGF في مقدمة الورم الغازية بعيدًا عن مركز الورم حيث قد يؤدي النخر ونقص الأكسجة إلى تعبير VEGF. يتم تصنيف كثافة تلطيخ VEGF على النحو التالي: - ، لا يوجد تعبير قابل للاكتشاف + ، وصمة عار متوسطة ++ ، أقوى بقعة تحت حقل 250X (الشكل 19). كما وصف Inoue ، نستخدم خلايا العضلات الملساء كعنصر تحكم داخلي إيجابي (Inoue وآخرون.، 1997). عادة ما يقوم اثنان من المحققين المختلفين بتقييم درجة التلوين دون معرفة البيانات السريرية.

الشكل 19. الإيجابية الحبيبية السيتوبلازمية لعامل النمو البطاني الوعائي (VEGF) في الخلايا السرطانية لسرطان غدي من النوع المعوي ضعيف التمايز (400X).


تلطيخ Endospore بطريقة Dorner

وصمة عار Carbolfuchsin
0.3 جرام من الفوشسين الأساسي
10 مل من الإيثانول ، 95٪ (حجم / حجم)
5 مل من بلورات الفينول المذابة بالحرارة
95 مل من الماء المقطر

قم بإذابة الفوكسين الأساسي في الإيثانول ثم أضف الفينول المذاب في الماء.
امزج واتركه يقف لعدة أيام. قم بالتصفية قبل الاستخدام.

مذيب إزالة اللون (كحول حامض)

97 مل من الإيثانول ، 95٪ (حجم / حجم)
3 مل من حمض الهيدروكلوريك (مركّز)

مضاد (محلول نيجروسين)

10 جرام من النيجروزين
100 مل ماء مقطر

  1. خذ شريحة نظيفة خالية من الشحوم وقم بعمل مسحة باستخدام تقنية معقمة.
  2. قم بتجفيف الهواء والحرارة لإصلاح الكائن الحي على شريحة زجاجية وتغطيته بقطعة من الورق النشاف أو قطع منشفة لتناسب الشريحة.
  3. تشبع الورق النشاف كاربولفوشين والبخار ل من 5 إلى 10 دقائقمع الحفاظ على رطوبة الورق وإضافة المزيد من الصبغة حسب الحاجة. بدلاً من ذلك ، يمكن تبخير الشرائح فوق وعاء من الماء المغلي.
  4. قم بإزالة الورق النشاف وأزل لون الفيلم باستخدام حمض كحول ل 1 دقيقة شطف بماء الصنبور وجفف.
  5. مزيد من اتخاذ قطرة من نيجروزين على أحد طرفي الشريحة وصنع طبقة رقيقة من البقعة في جميع أنحاء اللطاخة بمساعدة شريحة أخرى.
  6. اترك فيلم Nigrosin يجف في الهواء.
  7. بعد التجفيف بالهواء ، لاحظ الشريحة تحت الغمر بالزيت.

الخلايا الخضرية عديمة اللون ، والأبواغ حمراء ، والخلفية سوداء.


التقنيات المجهرية

يستخدم علماء الأنسجة وعلماء الخلايا تقنيات مجهرية - الفحص المجهري الضوئي ، الفحص المجهري الطوري ، الفحص المجهري للتداخل ، الفحص المجهري للاستقطاب ، الفحص المجهري الفلوري ، والفحص المجهري الإلكتروني - للتحقيق في جوانب معينة من بنية الخلية. يستخدم الفحص المجهري الطوري على نطاق واسع لدراسة بنية الخلايا الحية لأنه ، باستخدام مثل هذا الجهاز ، يمكن ملاحظة الهياكل الداخلية دون قتل الخلية وتلطيخها. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن عمل الصور المتحركة للخلايا المنقسمة أو الخلايا المتحركة باستخدام الفحص المجهري الطوري.

يتضمن مجهر التداخل تمرير حزمتين منفصلتين من الضوء عبر العينة. باستخدام الأداة المناسبة ، يمكن تحديد كتلة المادة لكل وحدة مساحة للعينة ، ويمكن رسم الخرائط الكنتورية للأجسام الصغيرة.

تمت دراسة العناصر البلورية أو الليفية ، وكلاهما يتميز بهيكل جزيئي منظم أو متعدد الطبقات ، باستخدام مجهر استقطاب ، وكان المجهر المستقطب مفيدًا بشكل خاص في دراسة التركيب التفصيلي للعظام.

في الفحص المجهري الفلوري ، الصور المرئية هي جزيئات من الأصباغ الفلورية المضافة إلى الخلايا التي ترتبط بمكونات خلوية محددة. الفلاتر المناسبة مطلوبة لضمان أن الضوء ذو الطول الموجي الأطول فقط هو الذي يساهم في الصورة. تم استخدام الأجسام المضادة الفلورية لتحديد أنواع معينة من البروتينات والمواد الأخرى في خلايا معينة من الأنسجة أو في مناطق معينة من الخلية. يتم تحضير الأجسام المضادة عن طريق حقن مستضد في الأرانب (على سبيل المثال ، بروتين الميوسين) ، والذي يحفز خلايا الدم البيضاء التي تسمى الخلايا الليمفاوية لتكوين الأجسام المضادة التي تتفاعل بشكل خاص مع المستضد. بعد عزل الأجسام المضادة وتنقيتها ، تلتصق الصبغة الفلورية الفلورية بها عن طريق تفاعل كيميائي. إذا كانت الأجسام المضادة الفلورية منتشرة على الأنسجة ، فإنها ترتبط بشكل خاص بالجزيئات التي تحفز تكوينها (الميوسين). يكشف مجهر التألق المواقع التي تحتوي على معقد الأجسام المضادة-المستضد كمناطق مضيئة مضيئة في خلفية مظلمة.

في المجهر الإلكتروني الماسح ، تُستخدم بقعة متحركة من الإلكترونات (جزيئات سالبة الشحنة) لمسح كائن وإنتاج صورة مشابهة لتلك التي تظهر على شاشة التلفزيون. بهذه الطريقة ، يمكن إنتاج صور ذات مظهر ثلاثي الأبعاد. باستخدام المجهر الإلكتروني للإرسال ، تمر حزمة من الإلكترونات عبر كائن ، مثل الخلية ، وتركز على الجانب الآخر على شاشة فلورية أو لوحة فوتوغرافية. يتم تركيز شعاع الإلكترونات في المجهر الإلكتروني الماسح ثم مسحه ضوئيًا عبر العينة. تُستخدم الإلكترونات التي تغادر العينة ، والتي ليست بالضرورة نفس الإلكترونات التي تصطدم بها ، للتحكم في شعاع أنبوب صورة أشعة الكاثود. تسمح مجاهر المسح الإلكتروني بالتقاط صور ليس فقط للجزيئات الكبيرة مثل الحمض النووي ولكن لأجسام صغيرة جدًا - الذرات الفردية لعناصر مثل اليورانيوم أو الثوريوم.


تلوين غرام: المبدأ ، الإجراء ، التفسير ، الأمثلة والرسوم المتحركة

يعد تلطيخ الجرام أحد تقنيات التلوين التفاضلي الشائعة والأكثر استخدامًا في علم الأحياء الدقيقة ، والذي قدمه عالم البكتيريا الدنماركي هانز كريستيان جرام في عام 1884. هذا الاختبار يميز البكتيريا إلى بكتيريا موجبة الجرام وبكتيريا سلبية الجرام ، مما يساعد في تصنيف وتمايز البكتريا. الكائنات الدقيقة.

مبدأ تلوين غرام

عندما تلطخ البكتيريا بالبقعة الأولية Crystal Violet وتثبيتها بواسطة الرائحة ، فإن بعض البكتيريا قادرة على الاحتفاظ بالبقعة الأولية وبعضها يتم إزالة اللون بواسطة الكحول. تحتوي جدران خلايا البكتيريا الموجبة للجرام على طبقة سميكة من مجمعات البروتين والسكر تسمى ببتيدوغليكان ومحتوى الدهون منخفض. يؤدي إزالة لون الخلية إلى جفاف جدار الخلية السميك وتقليصه ، مما يؤدي إلى إغلاق المسام في جدار الخلية ومنع البقعة من الخروج من الخلية. لذلك لا يمكن للإيثانول إزالة مركب Crystal Violet-Iodine المرتبط بالطبقة السميكة من الببتيدوغليكان للبكتيريا الموجبة للجرام ويظهر باللون الأزرق أو الأرجواني.

في حالة البكتيريا سالبة الجرام ، يأخذ جدار الخلية أيضًا مركب CV-Iodine ولكن نظرًا للطبقة الرقيقة من الببتيدوغليكان والطبقة الخارجية السميكة المكونة من الدهون ، يتم غسل مركب CV-Iodine. عندما يتعرضون للكحول ، يقوم مزيل اللون بإذابة الدهون في جدران الخلايا ، مما يسمح لمركب اليود البنفسجي البلوري بالتسرب من الخلايا. ثم عندما تلطخ مرة أخرى بالسفرانين ، تأخذ البقعة وتظهر باللون الأحمر.

  • البنفسجي الكريستالي ، البقعة الأولية
  • اليود ، لاذع
  • مزيل لون مصنوع من الأسيتون والكحول (95٪)
  • Safranin ، مضاد للبقع

إجراء تلوين غرام

  1. خذ شريحة نظيفة خالية من الشحوم.
  2. تحضير مسحة التعليق على الشريحة النظيفة بحلقة من العينة.
  3. إصلاح الهواء الجاف والحرارة
  4. تم سكب Crystal Violet وحفظه لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة وشطفه بالماء.
  5. اغمر اليود الغرام & # 8217s لمدة دقيقة واحدة واغسله بالماء.
  6. ثم اغسليها بكحول 95٪ أو أسيتون لمدة 10-20 ثانية ثم اشطفيها بالماء.
  7. أضف الزعفران لمدة دقيقة واحدة واغسله بالماء.
  8. جففي الهواء وجففيه وراقبيه تحت المجهر.

غرام إيجابي: اللون الأزرق / البنفسجي
سلبية الجرام: أحمر اللون

البكتيريا إيجابية الجرام: الشعيات ، العصوية ، المطثية ، الوتدية ، المكورات المعوية ، الغاردنريلا ، اللاكتوباسيلوس ، الليستيريا ، الميكوبلازما ، نوكارديا ، المكورات العنقودية ، العقدية ، العقدية ،إلخ.
البكتيريا سالبة الجرام: الإشريكية القولونية (بكتريا قولونية), السالمونيلا, شيغيلا، وغيرها من البكتيريا المعوية ، الزائفة,موراكسيلا, هيليكوباكتر, Stenotrophomonas, بيديلوفيبريو، بكتيريا حمض الخليك ، الليجيونيلا إلخ


3.2 ب: طرق التلوين العامة - علم الأحياء

معظم الخلايا عديمة اللون وشفافة ، وبالتالي يجب تلطيخ الأقسام النسيجية بطريقة ما لجعل الخلايا مرئية. يمكن أن تكون التقنيات المستخدمة إما غير محددة ، أو تلطيخ معظم الخلايا بنفس الطريقة تقريبًا ، أو محددة ، وتلطيخ بشكل انتقائي مجموعات أو جزيئات كيميائية معينة داخل الخلايا أو الأنسجة. عادةً ما يعمل التلوين باستخدام صبغة تلون بعض مكونات الخلايا بلون ساطع ، جنبًا إلى جنب مع صبغة مضادة تلون بقية الخلية بلون مختلف.

تلطيخ Basophilic و acidophilic.

حمضي تتفاعل الأصباغ مع الموجبة أو أساسي المكونات في الخلايا. البروتينات والمكونات الأخرى في السيتوبلازم أساسي، وسيرتبط بـ حمضي الأصباغ.
طريقة أخرى لقول ذلك هي أن البروتينات السيتوبلازمية موجودة حامض (تروق الحمض - أي الارتباط بالأصباغ الحمضية).

أساسي تتفاعل الأصباغ مع الأنيوني أو حمضي المكونات في الخلايا. احماض نووية نكون حمضي, وبالتالي تلتزم أساسي الأصباغ.

هناك طريقة أخرى لقول هذا وهي أن الأحماض النووية موجودة قاعدية (تروق أساسي).

تلطيخ H & ampE

يسمى نظام التلوين الأكثر استخدامًا ح & أمبير (الهيموتوكسيلين ويوزين). ح & أمبير يحتوي على اثنين من الأصباغ هيموتوكسيلين ويوزين.

يوزين هو حمضي الصبغة: سالبة الشحنة (الصيغة العامة للأصباغ الحمضية هي: Na + dye -). يصبغ الهياكل الأساسية (أو الحمضية) باللون الأحمر أو الوردي. يُطلق على هذا أحيانًا اسم "اليوزينيات".
وبالتالي فإن السيتوبلازم ملطخ باللون الوردي في الصورة أدناه ، بواسطة تلطيخ H & ampE.

الهيماتوكسيلين يمكن اعتباره أ أساسي صبغ (الصيغة العامة للأصباغ الأساسية هي: صبغ + Cl -). الهيموتوكسيلين هي في الواقع صبغة تسمى الهيماتين (تم الحصول عليها من شجرة الخشب) تستخدم في تركيبة مع أيونات الألومنيوم (Al 3+). يتم استخدامه لتلوين الهياكل الحمضية (أو القاعدية) باللون الأزرق الأرجواني. (لا يعتبر الهيماتوكسيلين صبغة أساسية بشكل صارم ، ولكنه يستخدم مع مادة "حادة" تجعل هذه البقعة تعمل كصبغة أساسية. ترتبط المادة اللاذعة (أملاح الألومنيوم) بالأنسجة ، ثم يرتبط الهيماتوكسيلين بالمادة اللاذعة ، مكونًا نسيجًا. -الرابط المتكرر بالهيماتوكسيلين.)
وبالتالي فإن النواة ملطخة باللون الأرجواني في الصورة أدناه ، بواسطة تلطيخ H & ampE.

هذا يعني أن النواة وأجزاء السيتوبلازم التي تحتوي على الحمض النووي الريبي تلطخ بلون واحد (أرجواني) ، وبقية السيتوبلازم تلون لونًا مختلفًا (وردي).

هذه صورة لمجموعة من الخلايا التي تبطن القناة.
يتم تمييز تجويف القناة وخليتان.

ما الهياكل ملطخة باللون الأرجواني (قاعدية)?

الحمض النووي (الكروماتين المتغاير والنواة) في النواة ، والحمض النووي الريبي في الريبوسومات وفي الشبكة الإندوبلازمية الخشنة كلاهما حمضي ، وبالتالي يرتبط الهيموتوكسيلين بهما ويلطخهما باللون الأرجواني.
بعض المواد خارج الخلية (أي الكربوهيدرات في الغضروف) هي أيضًا قاعدية.

ما هي الهياكل الملطخة باللون الوردي (اليوزيني أو الحمضي)?

معظم البروتينات في السيتوبلازم أساسية ، وبالتالي يرتبط اليوزين بهذه البروتينات ويلطخها باللون الوردي. وهذا يشمل خيوط السيتوبلازم في خلايا العضلات والأغشية داخل الخلايا والألياف خارج الخلية.

أنواع البقع الأخرى

هناك العديد من أنواع البقع الأخرى التي يصبغ كل منها الأنسجة بطرق مميزة.

أسئلة لك لتفكر فيها.

ما هو حجم قطر الخلية بالنسبة للخلية الموجودة في هذه الصورة؟

لماذا تظهر النوى في الصورة أعلاه بأحجام مختلفة؟ هل هي أحجام مختلفة حقًا ، أم أن هناك تفسيرًا بديلًا؟

(تلميح ، فكر فيما حدث عندما تم قطع الأقسام ، وحول حجم الخلايا).

دليل علم الأنسجة ونسخة منه كلية العلوم البيولوجية ، جامعة ليدز | الاعتمادات


شريحة تلطيخ المعلومات المجهر

الخلايا ملطخة بشكل أساسي لتحسين تصور الخلية أو مكونات معينة. أحيانًا تكون الخلايا ملطخة أيضًا لتسليط الضوء على عمليات التمثيل الغذائي أو للتمييز بين الخلايا الحية والميتة.

يوجد أدناه قائمة بالبقع شائعة الاستخدام ، غالبًا لأنواع مختلفة من الخلايا. يمكن استخدام كل تلك المدرجة في الخلايا الثابتة (غير الحية) وأي منها يمكن استخدامه على الخلايا الحية مذكور في نهاية الوصف بكلمة "LIVE".

  • بسمارك براون - يصبغ نوعا من البروتين يسمى حامض الميوسين باللون الأصفر. يعيش.
  • كارمين - ألوان النشا الحيواني (جليكوجين) ، أحمر.
  • كوماسي بلو - تصبغ البروتينات باللون الأزرق الساطع ، وغالبًا ما تستخدم في هلام التفريد
  • الكريستال البنفسجي - تلطخ جدران الخلايا باللون الأرجواني عندما يقترن برائحة. تستخدم هذه البقعة في تلوين غرام.
  • دابي - بقعة نووية فلورية تثيرها الأشعة فوق البنفسجية ، تظهر التألق الأزرق عند ارتباطها بالحمض النووي. يعيش.
  • يوزين - مضاد للهيماتوكسيلين ، هذه البقعة تلون خلايا الدم الحمراء ، المادة السيتوبلازمية ، أغشية الخلايا ، والتراكيب خارج الخلية باللون الوردي أو الأحمر.
  • بروميد الايثيديوم - تلون هذه البقعة الخلايا غير الصحية في المراحل الأخيرة من موت الخلايا المبرمج ، أو موت الخلايا المتعمد ، فلورسنت أحمر برتقالي.
  • فوشسين - تستخدم هذه البقعة في تلطيخ الكولاجين أو العضلات الملساء أو الميتوكوندريا.
  • الهيماتوكسيلين - وصمة عار نووية تلطخ النوى برائحة زرقاء بنفسجية أو بنية.
  • بقع هويشت - يستخدم نوعان من البقع الفلورية ، 33258 و 33342 لصبغ الحمض النووي في الخلايا الحية.
  • اليود - يستخدم كمؤشر نشا. عندما يتحول النشا واليود في محلول إلى اللون الأزرق الداكن.
  • المسرطنة - مضاد أزرق مخضر للسافران في تلطيخ Gimenez للبكتيريا. غالبًا ما تستخدم هذه البقعة لتلطيخ الجراثيم.
  • الميثيلين الأزرق - تلطيخ الخلايا الحيوانية لجعل النوى أكثر وضوحا.
  • محايد / تولويلين أحمر - بقع نوى حمراء. يعيش.
  • النيل الأزرق - نوى البقع الزرقاء. يعيش.
  • النيل الأحمر / النيل الأزرق أوكسازون - تتكون هذه البقعة من غليان النيل الأزرق بحمض الكبريتيك ، مما يخلق مزيجًا من اللون الأحمر النيلي والأزرق النيلي. يتراكم اللون الأحمر في كريات الدهون داخل الخلايا ، مما يؤدي إلى تلطيخها باللون الأحمر. يعيش.
  • رباعي أكسيد الأوزميوم - يستخدم في المجهر الضوئي لصبغ الدهون بالأسود.
  • رودامين - صبغة فلورية خاصة بالبروتين تستخدم في الفحص المجهري الفلوري.
  • سفرانين - وصمة عار نووية تستخدم كمضاد للبقع أو لتلوين الكولاجين الأصفر.

توضح الصورة أعلاه كيفية رسم وصمة عار في شريحة معدة. مع وضع الغطاء في مكانه أعلى العينة ، ضع قطرة من البقعة على حافة زلة الغطاء. على الجانب المقابل من الغطاء ، ضع منشفة ورقية أو قطعة قماش لسحب السائل من قسيمة الغطاء. عندما يتم سحب السائل ، سيتم سحب البقعة تحت غطاء الغطاء.


شاهد الفيديو: Lecture 1 وراثة احياء مجهرية (يونيو 2022).


تعليقات:

  1. Jed

    بيننا نتحدث ، في رأيي ، من الواضح. أوصي بالبحث عن إجابة سؤالك في google.com

  2. Radbourne

    أعتذر ، لكن في رأيي ، أنت مخطئ. دعونا نناقشها. اكتب لي في رئيس الوزراء ، وسوف نتواصل.

  3. Voodoojind

    معذرة ، لقد فكرت وأزالت السؤال

  4. Yannic

    أعتقد أنك مخطئ. أدخل سنناقشها. اكتب لي في PM.



اكتب رسالة