معلومة

المعمل 3: صبغة بسيطة وسلبية وصبغة جرام - علم الأحياء

المعمل 3: صبغة بسيطة وسلبية وصبغة جرام - علم الأحياء


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

تحضير مستحلب:

1. العمل في أزواج ، قم بتسمية كل شريحة ، وارسم دائرة في وسط الشريحة بقلم رصاص شمعي يتم توفيره على طاولتك ، لا تستخدم أداة شربي ، فهذا سيحافظ على تركيز البكتيريا في منطقة واحدة على الشريحة.

2. قم بإعداد مستحلب على كل شريحة:

  • إذا كنت تأخذ بكتيريا من طبق ، ضع قطرة صغيرة من الماء على شريحة وأضف البكتيريا بطريقة معقمة.
  • إذا كنت تأخذ بكتيريا من مرق ، ضع 3-6 حلقات من البكتيريا على شريحة بدون ماء مضاف.

3. ستحتاج أنت وشريكك في المعمل إلى إعداد الشرائح التالية:

  • 3 شرائح من Staphylococcus epidermidis (واحدة للبقع البسيطة ، وواحدة للبقع الغرام ، وواحدة كنسخة احتياطية)
  • 3 شرائح من Pseudomonas aeruginosa (واحدة للبقع البسيطة ، وواحدة للبقع الغامقة ، وواحدة كنسخة احتياطية)
  • شريحتان من S. البشروية و P. الزنجارية مختلطة معًا (واحدة لصبغة جرام ، وواحدة كنسخة احتياطية)

4. امزج بلطف حتى تحصل على خليط قاتم (يجب أن يبدو مثل الحليب الخالي من الدسم)

ملحوظة

إذا اختلطت بقوة شديدة ، فستفقد البنية البكتيرية.

5. اترك الشريحة (الشرائح) تجف في الهواء على جهاز تسخين الشرائح. أثناء تجفيف الشرائح ، ابدأ بقعتك السلبية.

6. بمجرد أن يتبخر السائل تمامًا ، يتم إصلاح الحرارة عن طريق تمرير الشريحة عبر اللهب ثلاث مرات.

ملحوظة

إذا قمت بإصلاح القليل من الحرارة ، فإن البكتيريا سوف تغسل الشريحة. إذا قمت بإصلاح الحرارة أكثر من اللازم ، فسوف تطهو البكتيريا وتفسد طبيعتها.

7. اسمح للشريحة أن تبرد ثم استمر في بروتوكول التلوين الخاص بك.

البقعة السلبية:

تعريف

Nigrosin هو بقعة بسيطة وغير مباشرة تستخدم لتحديد مورفولوجيا البكتيريا. يُنظر إلى أشكال وأحجام الكائنات الحية على أنها خطوط عريضة خالية من الألوان مقابل الخلفية المظلمة. تتمثل ميزة استخدام هذه الطريقة في عدم الحاجة إلى التثبيت المسبق بالحرارة ، لذلك يتم رؤية الكائنات الحية في أشكال أكثر واقعية. نيجروزين هي بقعة حمضية تصبح سالبة الشحنة. نظرًا لأن سطح معظم الخلايا البكتيرية مشحون سلبًا ، فإن سطح الخلية يصد البقعة. سوف يلطخ زجاج الشريحة ، لكن الخلايا البكتيرية لن تلطخ.

8. إذا كنت بحاجة إلى ذلك ، فاخرج إلى الخارج وشاهد هذا الفيديو للتأكد من فهمك لكيفية تنفيذ الإجراء: www.youtube.com/watch؟v=avveXgPWVJ8 (يمكنك أيضًا استخدام google "فيديو التلطخ السلبي")

9. أضف قطرة صغيرة من النيجروزين إلى الشريحة.

10. انقل بشكل معقم حلقة واحدة من بكتيريا NEGATIVE STAIN MIX إلى قطرة النيجروزين واخلطها برفق.

11. استخدم شريحة ثانية مثبتة بزاوية 45 درجة لتشويه عبر الشريحة.

12. اترك الشرائح لتجف في الهواء على المنضدة. لا تستخدم جهاز تسخين الشرائح!

13. كرر هذا الإجراء لعمل شريحة من S. epidermidis وشريحة من P. aeruginosa 14. افحص الشرائح الثلاث تحت الغمر بالزيت وسجل نتائجك في ورقة العمل الخاصة بك.

بقعة بسيطة:

تعريف

الميثيلين الأزرق وصمة عار بسيطة ومباشرة تستخدم لتحديد مورفولوجيا البكتيريا (الشكل والترتيب). إنها صبغة كاتيونية (شحنة موجبة) تلون الخلية باللون الأزرق. يؤدي وجود جزيئات سالبة الشحنة في الخلية (مثل DNA و RNA) إلى تلطيخ الخلية باللون الأزرق.

15. استخدم الشرائح التي أعددتها بالفعل.

16. أضف صبغة الميثيلين الزرقاء إلى شريحة مثبتة بالحرارة واتركها لمدة دقيقتين.

17. امسك الشريحة بزاوية واشطفها برفق بالماء من زجاجة البخّ.

18. جفف برفق بورق ماص للتخلص من الماء الزائد.

19. افحص تحت الغمر بالزيت وسجل نتائجك في ورقة العمل الخاصة بك.

غرام وصمة عار:

تعريف

صبغة غرام هي تقنية التلوين الأكثر أهمية والمستخدمة عالميًا في مختبر علم الجراثيم. يتم استخدامه للتمييز بين بكتيريا الجرام (+) و الجرام (-). يكمن الفرق بين البكتيريا الجرام (+) والجرام (-) في قدرة جدار الخلية للكائن الحي على الاحتفاظ بالبنفسج البلوري.

18. استخدم الشرائح التي أعددتها بالفعل (1) S. البشروية (2) P. الزنجارية (3) S. الزنجارية مختلطة معًا.

19. دهنها بالكريستال البنفسجي لمدة 1 دقيقة ، ثم اشطفها برفق بالماء.

20. عالجيها بمزيج اليود لمدة دقيقة واحدة ، ثم اشطفيها برفق بالماء.

21. اشطف باستخدام ~ 3-6 قطرات من 95٪ كحول لإزالة اللون ، ثم اشطفها برفق بالماء.

22. ضعه بالسافران لمدة 30 ثانية ، ثم اشطفه بالماء.

ملحوظة

تستحق بقع الجرام الصحيحة للثقافة المختلطة نقطتين كرصيد إضافي!


الغرض الرئيسي من هذه التجربة في هذا المعمل هو تحديد الخصائص البيوكيميائية لبكتيريا غير معروفة باستخدام صبغة الجرام والقاعدة أولاً.

غالبًا ما يرغب الأطباء في تحديد نوع البكتيريا الموجودة في المريض المصاب بعدوى. بصرف النظر عن الاختبارات الأخرى ، فإن الخبراء ش.

تسمح بروتوكولات تلطيخ البكتيريا بتصور مورفولوجيا الخلايا وتحديد الخصائص. في هذه التجربة ، تم اختبار Klebsiella Pneumoniae w.

بالنسبة للاختبار المائي ، كانت صفيحة النشا تحتوي على نقاط بارزة حول النمو البكتيري مما يشير إلى تحلل النشا. في طبق يحتوي على الدهون لم يكن هناك د.

الملخص: كان الهدف من هذه السلسلة من التجارب هو التعرف على نوعين من البكتيريا غير المعروفة. تم اختيار ثقافة المرق رقم 20 وإخضاعها لمعايير الجودة.

تتفاعل هذه الكواشف مع الإندول لإنتاج مركب أحمر اللون. مع عدم وجود إندول ، لا يوجد تغيير في اللون حتى بعد إضافة المناسب.

شكل المركب 7 طبقتين أيضًا ، لكن كلاهما كان أصفر. شكل المركب 8 لون أحمر غامق للغاية. تحول المركب 9 أيضًا الحل إلى اللون الأحمر. مجمع 10 دي.

بعد حوالي دقيقة ، كان من المفترض أن نكون قادرين على معرفة ما إذا كان الوتر قد تشكل أم لا. لم يكن لدينا شكل خيط ، لذلك كان لدينا بكتيريا موجبة الجرام و.

يوفر المضاد الحيوي الموجود في Beta Lactamase النتائج الوحيدة في التجربة. يبلغ قطر قرص الأمبيسلين العلوي 2.7 سم. وسط الأمبيك.

من خلال دمج المركب غير المعروف مع حمض وقاعدة وملحين ، تم تحديد تفاعله. تفاعل المركب غير المعروف بحمض الكبريتيك (H2SO4.


المعمل 3: وصمة عار بسيطة وسلبية وصبغة غرام - علم الأحياء

إذا لم تتمكن من المشاهدة بملف أو ملف بمنشار ، فلن تكون جيدًا كخبير تجريبي. - Augustin Jean Fresnel ، 1788-1827

صبغات

نظرًا لأنك لاحظت عرض الحوامل الرطبة في المختبر السابق ، فمن الصعب رؤية معظم البكتيريا تحت مجهر المجال الساطع. البكتيريا عديمة اللون تقريبًا (تذكر أن جميع الخلايا تتكون أساسًا من الماء) وبالتالي تظهر تباينًا ضئيلًا مع المرق الذي يتم تعليقها فيه. لتصور البكتيريا ، يتم استخدام إما الأصباغ أو البقع ، أو مصدر بديل للإضاءة (تباين الطور أو قيود التداخل التفاضلي). نظرًا لأن تلطيخ الخلايا البكتيرية سريع نسبيًا وغير مكلف وبسيط ، فهو الأسلوب الأكثر استخدامًا لتصور الخلايا البكتيرية. لا يؤدي التلوين إلى تسهيل رؤية البكتيريا فحسب ، بل يسمح أيضًا بتصور مورفولوجيتها (مثل الحجم والشكل) بسهولة أكبر. في بعض الحالات ، يمكن استخدام بقع معينة لتصور بعض الهياكل (الأسواط ، الكبسولات ، الأبواغ الداخلية ، إلخ). من الخلايا البكتيرية.

هناك العديد من طرق التلوين التي تُستخدم بشكل روتيني مع البكتيريا. يمكن تصنيف هذه الطرق على أنها 1) بسيطة (غير محددة) و 2) تفاضلية (محددة). تتفاعل البقع البسيطة مع جميع الميكروبات بطريقة متطابقة. إنها مفيدة فقط لزيادة التباين بحيث يمكن تحديد مورفولوجيا وحجم وترتيب الكائنات الحية. تعطي البقع التفاضلية نتائج متفاوتة حسب الكائن الحي الذي تتم معالجته. غالبًا ما تكون هذه النتائج مفيدة في تحديد الميكروب.

البقع (الأصباغ) هي مواد كيميائية تحتوي على الكروموفورات ، وهي مجموعات تنقل اللون. يتم تحديد خصوصيتها من خلال تركيبها الكيميائي. وعادة ما تكون البقع عبارة عن أملاح يكون فيها أحد الأيونات ملونًا. (الملح هو مركب يتكون من أيون موجب الشحنة وأيون سالب الشحنة.) على سبيل المثال ، صبغة الميثيلين الأزرق هي في الواقع ملح ميثيلين أزرق كلوريد والذي سينفصل في الماء إلى أيون ميثيلين أزرق موجب الشحنة وهو أزرق اللون وأيون الكلوريد سالب الشحنة وهو عديم اللون. تنقسم البقع الميكروبيولوجية الشائعة عمومًا إلى فئتين - البقع الأساسية أو البقع الحمضية (على الرغم من وجود عدد قليل من البقع مثل حبر الهند) وهي محايدة). الصبغة الأساسية هي بقعة كاتيونية (موجبة الشحنة) وبالتالي تتفاعل مع المواد المشحونة سلبًا. يحتوي السيتوبلازم في جميع الخلايا البكتيرية على شحنة سالبة طفيفة عند النمو في وسط قريب من درجة الحموضة المحايدة ، وبالتالي سوف يجذب ويرتبط مع الأصباغ الأساسية. بعض الأمثلة على الأصباغ الأساسية هي الكريستال البنفسجي ، والسفرانين ، والفوشسين الأساسي ، والأزرق الميثيلين. تحتوي الأصباغ الحمضية على كروموفورات سالبة الشحنة ويتم صدها بواسطة السطح البكتيري لتشكيل ترسبات في الكائن الحي. إنها تلطخ الخلفية وتترك الميكروب شفافًا. نيجروزين والكونغو الأحمر أمثلة على الأصباغ الحمضية.

ملحوظة: الأصباغ المستخدمة للتلوين الجرثومي هي أصباغ الأنيلين بشكل عام ، مشتقة من قطران الفحم ، مما يعني أنها من المحتمل أن تكون مسببة للسرطان ويجب التعامل معها بعناية. تجنب ملامستها عن طريق إبعادها عن الجلد والملابس والمقاعد.

للوهلة الأولى ، يبدو أن أسهل طريقة لتلطيخ الخلايا البكتيرية هي ببساطة خلط المعلق البكتيري مع الصبغة وصنع تركيبة مبللة من هذا الخليط. لسوء الحظ ، إذا حاولت تلطيخ الخلايا البكتيرية بهذه الطريقة ، فستجد أن هناك الكثير من الخلفية (صبغة غير منضمة) للسماح بتصور الخلايا. لذلك ، تحتاج إلى إزالة الصبغة غير الملتصقة. سيؤدي غسل الصبغة ببساطة إلى إزالة الخلايا مع الصبغة الزائدة. لذلك ، تحتاج إلى آلية لإصلاح الخلايا على الشريحة قبل التلوين للسماح بإزالة الصبغة الزائدة مع الاحتفاظ بالخلايا على الشريحة. طريقة بسيطة هي طريقة التجفيف بالهواء وتثبيت الحرارة. يتم تثبيت حرارة الكائنات الحية عن طريق تمرير مسحة مجففة بالهواء للكائنات من خلال لهب موقد غاز. تخثر الحرارة بروتينات الكائنات الحية مما يتسبب في التصاق البكتيريا بالشريحة. كن حذرًا جدًا حتى لا تفرط في تسخين الكائنات الحية عند تثبيتها على شريحة. هذا يشوه عينة الكائنات الحية. ضع في اعتبارك تشبيه البيض المقلي. عندما تسقط بيضة نيئة في مقلاة باردة ، يكون لها شكل معين. ابدأ في تسخينه وترسب البروتينات (الزلال) على السطح السفلي للبيضة وثبّت البيضة في المقلاة. في هذه المرحلة ، كان هناك حد أدنى من التشوه في شكل البيضة ككل ، تم ترسيب نسبة صغيرة فقط من البروتينات. إذا واصلت استخدام الحرارة ، سيتغير شكل البيضة بأكملها وسيتحول في النهاية إلى بقايا متفحمة. عندما تقوم بتثبيت شريحة ، فأنت تريد تطبيق حرارة كافية لتعجيل البروتينات للسماح للخلايا بالالتصاق بالشريحة ولكن ليس لتغيير شكل الخلايا بشكل جذري (أو تقليلها إلى بقايا متفحمة).

تحضير مسحة بكتيرية وتثبيت الحرارة

  1. قم بتنظيف الشريحة باستخدام Bon Ami أو أي مادة تنظيف مناسبة أخرى. جفف الشريحة برفق بقطعة قماش خالية من النسالة. (بدلاً من ذلك ، من الممكن شراء شرائح تم تنظيفها مسبقًا)
  2. ضع قطرة صغيرة جدًا من الماء المقطر على سطح الشريحة.
  3. قم بإزالة كمية صغيرة من المزرعة من سطح الآجار بطريقة معقمة وقم بلمسها عدة مرات بقطرة الماء حتى تتحول إلى غائم.
  4. احرق البكتيريا المتبقية من الحلقة. (إذا تمت إضافة الكثير من الثقافة إلى الماء ، فلن ترى بكتيريا فردية ملطخة بوضوح).
  5. باستخدام الحلقة ، انشر التعليق على الشريحة بأكملها لتشكيل طبقة رقيقة.
  6. اترك هذا التعليق الرقيق حتى يجف تمامًا في الهواء.
  7. قم بتمرير الشريحة (جانب الفيلم لأعلى) من خلال شعلة موقد بنسن 3 أو 4 مرات للتثبيت الحراري. تحذير: قد تؤدي الحرارة الزائدة إلى تشويه الكائن الحي ، وفي حالة صبغة الجرام ، قد تتسبب الكائنات إيجابية الجرام في تلطيخ الجرام بشكل سلبي. يجب أن تكون الشريحة دافئة جدًا ولكن ليست ساخنة جدًا لتثبيتها.
  1. قم بتنظيف الشريحة باستخدام Bon Ami أو أي مادة تنظيف مناسبة أخرى. جفف الشريحة برفق بقطعة قماش خالية من النسالة. (بدلاً من ذلك ، من الممكن شراء شرائح تم تنظيفها مسبقًا)
  2. ضع معقمًا 2 أو 3 حلقات من الثقافة على شريحة نظيفة. لا تستخدم الماء.
  3. باستخدام الحلقة ، انشر التعليق على الشريحة بأكملها لتشكيل طبقة رقيقة.
  4. اترك هذا التعليق الرقيق حتى يجف تمامًا في الهواء.
  5. قم بتمرير الشريحة (جانب الفيلم لأعلى) من خلال شعلة موقد بنزن 3 أو 4 مرات للتثبيت الحراري.

تلطيخ بسيط (مباشر) بأزرق الميثيلين

  1. قم بإعداد مسحة ثابتة بالحرارة للثقافة التي ترغب في فحصها
  2. قم بتغطية اللطاخة باللون الأزرق الميثيلين
  3. اترك الصبغة على اللطاخة لمدة دقيقة تقريبًا. (لاحظ أن وقت التلوين ليس حرجًا. في مكان ما بين 30 ثانية ودقيقتين ، يجب أن يمنحك بقعة مقبولة. كلما تركت الصبغة لفترة أطول ، بشكل عام ، كانت البقعة أغمق.)
  4. اغسل البقعة الزائدة من الشريحة التقط الشريحة من أحد طرفيها وثبتها بزاوية فوق صينية التلوين. باستخدام زجاجة غسيل الماء المقطر ، اغسل بلطف الميثيلين الأزرق الزائد من الشريحة عن طريق توجيه تيار لطيف من الماء فوق سطح الشريحة .. اغسل أي بقعة قد تكون على الجزء السفلي من الشريحة أيضًا.
  5. امسح البقع الزائدة باستخدام ورق ماص. لا تفرك الشريحة ، بل ضع الشريحة بين ورقتين من ورق ماص واضغط لأسفل برفق. سوف يمتص الورق الصبغة الزائدة.
  6. افحص الشريحة تحت مجهر المجال الساطع.
  7. سجل الشكل والترتيب والحجم التقريبي للكائنات الحية. يجب أن يكون لديك بيانات عن ثقافتين لديك لطختهما.
  1. قم بتنظيف الشريحة باستخدام Bon Ami أو أي مادة تنظيف مناسبة أخرى. جفف الشريحة برفق بقطعة قماش خالية من النسالة. (بدلاً من ذلك ، من الممكن شراء الشرائح التي تم تنظيفها مسبقًا).
  2. ضع قطرة صغيرة (مملوءة واحدة أو اثنتين) من البقعة السلبية (الحبر الهندي) بالقرب من نهاية الشريحة.
  3. نقل حلقة واحدة = مليئة بالعينة البكتيرية إلى حبر الهند واخلط الاثنين معًا.
  4. امسك شريحة نظيفة بزاوية 20 درجة تقريبًا للشريحة الأولى. المس حافة الشريحة النظيفة بمزيج البكتيريا / البقع حتى ينتشر الخليط عبر الحافة.
  5. انشر التعليق عبر سطح الشريحة عن طريق سحب الشريحة النظيفة بعيدًا عن الخليط. بشكل أساسي ، ستستخدم الشريحة النظيفة لدفع الخليط عبر سطح الشريحة. عندما تنتهي من فرد الشريحة ، ضع الشريحة "النظيفة" في وعاء مطهر.
  6. جفف الشريحة بالهواء. لا تقم بإصلاح الحرارة.
  7. افحص تحت مجهر المجال الساطع.
  8. سجل الشكل والترتيب والحجم التقريبي للكائنات الحية. يجب أن يكون لديك بيانات عن عينتين قمت بتلطيخهما

التكليف: عند الانتهاء من المختبر يجب عليك


المعامل الافتراضية والتجارة

هذا هو برنامج بيتا. ما زلنا في طور الاختبار وبناء هذه المعامل. من المحتمل أن تواجه أخطاء ، وعدم تطابق بين الصوت والنص ، وما إلى ذلك. لن يعكس هذا بالضرورة جودة وحالة الإنشاء النهائي.
إذا كانت لديك أسئلة أو استفسارات ، فاتصل بنا على [email protected]

فيديو تلوين غرام

تم دعم هذا العمل من قبل USDA CSREES والمعهد الوطني للأغذية والزراعة التابع لوزارة الزراعة الأمريكية في إطار مشروعين لمنح تحدي التعليم العالي: 2008-38411-19055 و 2011-38411-30625. ونسخ 2008-2021 NMSU Board of Regents. الجامعات المتعاونة جامعة ولاية ساوث داكوتا وجامعة ولاية نورث داكوتا وجامعة ولاية نيو مكسيكو كلها فرص عمل متكافئة / عمل إيجابي أرباب عمل ومعلمين.

لا تميز NMSU على أساس العمر أو النسب أو اللون أو الإعاقة أو الهوية الجنسية أو المعلومات الجينية أو الأصل القومي أو العرق أو الدين أو الانتقام أو الحالة الطبية الخطيرة أو الجنس (بما في ذلك الحمل) أو التوجه الجنسي أو الانتماء الزوجي أو حالة المحاربين القدامى المحمية في برامجها وأنشطتها كما هو مطلوب بموجب لوائح وقوانين تكافؤ الفرص / العمل الإيجابي وسياسة الجامعة وقواعدها. لمزيد من المعلومات ، يرجى قراءة إشعار عدم التمييز NMSU. (يفتح في نافذة جديدة)

بالنسبة إلى مشكلات الويب مثل الأخطاء الإملائية أو الارتباطات المعطلة أو المشكلات الفنية الأخرى بالموقع ، يرجى الاتصال بـ NMSU Innovative Media Research and Extension.


المعلومات السريرية تناقش علم وظائف الأعضاء ، والفيزيولوجيا المرضية ، والجوانب السريرية العامة ، من حيث صلتها بالاختبار المعملي

صبغة جرام هي صبغة عامة تستخدم على نطاق واسع في علم الأحياء الدقيقة للتمييز الأولي للكائنات الحية الدقيقة. صبغة جرام هي واحدة من أبسط الطرق وأقلها تكلفة وأكثرها فائدة من بين الطرق السريعة المستخدمة لتحديد وتصنيف البكتيريا.

تُستخدم صبغة جرام لتوفير معلومات أولية بشأن نوع الكائنات الحية الموجودة مباشرة من العينات السريرية أو من النمو على لوحات المزرعة. تستخدم هذه البقعة لتحديد وجود الكائنات الحية الدقيقة في سوائل الجسم المعقمة بشكل طبيعي (السائل النخاعي ، السائل الزليلي ، السائل الجنبي ، السائل البريتوني). كما أنها تستخدم لفحص عينات البلغم لإثبات مقبولية المزرعة البكتيرية (تعتبر & lt25 الخلايا الظهارية الحرشفية لكل حقل عينة مقبولة للزرع) وقد تكشف عن الكائن الحي المسبب في الالتهاب الرئوي الجرثومي.


شاهد الفيديو: شرح طريقة تصبيغ البكتيريا بصبغات غرام وعمل المسحة البكتيرية gram staining bacteria (يونيو 2022).


تعليقات:

  1. Konna

    المدونة رائعة ، سأوصي بها لكل من أعرف!

  2. Manawanui

    تحية طيبة! إنه ليس اليوم الأول الذي قرأت فيه هذه الصفحة. لكن سرعة الاتصال ضعيفة. كيف يمكنك الاشتراك في موجز RSS الخاص بك؟ أود أن أقرأ لك أكثر.

  3. Polyeidus

    برافو ، رسالة مختلفة

  4. Kagrel

    ووه هوراي هذا لي

  5. Kigabar

    ارتكاب الاخطاء. نحن بحاجة إلى مناقشة.



اكتب رسالة